纯菌（真菌、细菌）

适用于二代 / 三代测序相关纯培养物送样。

组织样本

• 样本量：菌体≥2g，-80℃保存，干冰寄送
• 样本准备：对数期 4ml（细菌草图可以低至 1–2 毫升）菌液，4000×g（12000rpm）离心 2min（4℃），弃上清，收集菌沉淀，用 1 毫升生理盐水或者 PBS 重悬菌沉淀，4000×g（12000rpm）离心 2min，弃上清，保留菌沉淀。（有条件建议送 2 个平行样本，避免一次提取不成功）
• 甘油保存的样本，需要重新用液体培养基（例如 LB）活化到对数期，不可直接送甘油保存的菌株
• 不建议送固体培养皿的菌；如是只有固体培养基才能活，可以刮到有 PB 缓冲液的离心管里面，离心，送沉淀 2g 以上
• 真菌（＞0.5g）大型菇类等，建议送菌丝，不建议送孢子或是子实体，杂合率较高，不利于组装
• 样本一定为非灭活样本，灭活会导致核酸严重降解
• 不接收《人间传染的病原微生物目录》里涉及的菌种样本

核酸样本

浓度 >5ng/μl，体积 20μl≤V≤120μl，总量 >400ng。针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况，需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量。

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宏基因组

组织样本

• a. 土壤／污泥／沉积物／腐殖质：≥5ml（离心管刻度）或≥3g；建议使用 5ml EP 或 15ml、50ml 离心管进行装载，并用封口膜封口，使用自封袋容易撒漏导致样品交叉污染
• b. 粪便、肠道内容物≥2mL、食糜≥4mL（离心管刻度）或≥2g；粪便样本不建议保护液寄送，直接寄送粪便提取效果更好；拭子建议用保护液
• c. 瘤胃液／发酵液／组织液／冲洗液（离心有明显沉淀）3–5ml 或沉淀≥1g
• d. 水体、空气滤膜：直径 4cm，滤膜 3 张（有明显颜色沉淀在滤膜上）
• e. 拭子：5–10 个；无菌拭子反复擦拭，拭子表面有肉眼可见变化，对于较干燥的表面，可用生理盐水浸湿拭子后擦拭，以采取更多的微生物

核酸样本

浓度 >5ng/μl，体积 20μl≤V≤120μl，总量 >400ng。针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况，需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量。

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扩增子样品

• a. 植物组织>0.5g，成熟组织部位，例如植物根、茎、种子等部位建议 2 倍以上送样
• b. 动物组织>0.3g，核酸不丰富部位，例如脂肪、成熟皮肤、骨头等部位建议增加送样量
• c. 动物血液（哺乳类）>1mL；动物血液（红细胞有核类）>0.5mL，血清血浆需酌情增加送样量
• d. 唾液>4mL
• e. 菌液（对数生长期）>4mL；菌体≥4mL 菌液离心；真菌菌丝>0.5g
• f. 土壤>2mL（离心管刻度）
• g. 粪便、肠道内容物、食糜≥1mL（离心管刻度）；瘤胃液>2mL；胃液有浑浊，离心送沉淀为佳
• h. 水体（滤膜）：直径 4cm，滤膜 3 张，如果菌群丰度较低，建议增加送样量
• i. 拭子>4 个，拭子表面有明显颜色变化，达到富集微生物的目的

核酸样本

浓度 >5ng/μl，体积 20μl≤V≤120μl，总量 >400ng。针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况，需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量。

因部分客户核酸含有杂质、颜色等物质导致会产生大量损失，为保证您的样本一次检测合格并节约宝贵的重送样时间，送样建议量是高于公司判定标准的，请您在核酸量足够的前提下尽量按照送样建议来送样，感谢您的大力支持与配合。

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原核转录组

菌体样本

• a. 建议送样量：菌体细胞>1×10⁷ 个或菌体>0.5g
• b. 建议收集液体培养基中对数生长期的菌体
• c. 通过低速离心收集菌体并尽可能将培养基去除干净，然后用无菌水或 PBS 缓冲液冲洗样品 1～3 遍，送菌液沉淀
• d. 不建议用 RNAlater 保存，因为 RNAlater 密度较大，取时不易分离菌体
• e. 不建议加入裂解液，细菌的提取一般使用试剂盒
• f. 不建议加 TRIzol，影响菌体裂解
• g. 直接送滤膜时，建议送样≥5 张，不要将多张滤膜叠在一起后速冻寄送，将滤膜一张一张放入 50ml 离心管，液氮速冻 15min，-80℃冻存，干冰寄送

核酸样本

• a. 针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况，需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量
• b. 核酸样品建议使用 1.5ml、2ml EP 管装载样品，其他保存管容易破裂且不利于保存样品和后续实验的开展
• c. 为了防止样品污染和混淆，禁止使用 96 孔板和深孔板装载样品
• d. 用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发，建议将样品管盖用封口膜缠绕 4–5 圈

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真核转录组

植物组织

• 成熟部位，例如植物茎、根、种子等部位建议 2 倍以上送样
• 需要清洗的样本，可以无菌水或 75% 乙醇冲洗表面，吸水纸吸干
• 样本离体后，在冰上立即分割 50–100mg 小块，2–3 管备份，放置冻存管并立即液氮速冻，放置 -80℃保存，避免未经速冻直接放 -80℃保存
• 不建议使用 RNAlater 等 RNA 保护试剂保存植物组织样品；因为植物细胞含有细胞壁，RNA 保护试剂很难渗透
• 不建议使用 TRIzol 保存；TRIzol 法并不适用于萃取大多数植物样本，植物组织中的 RNA 提取多采用专门的提取试剂盒，而 TRIzol 保存会影响试剂盒提取液的提取效果

动物组织

• 对于动物组织，建议选用新鲜样本，采集样品时应选取核酸含量较多的部位；核酸不丰富部位，例如脂肪、成熟皮肤、骨头等部位建议酌情增加送样量
• 生理盐水漂洗；剔除结缔组织等非研究组织
• 样本离体后，在冰上立即分割 50–100mg 小块，2–3 管备份，放置冻存管并立即液氮速冻，放置 -80℃保存，避免未经速冻直接放 -80℃保存
• 无法及时用液氮速冻保存的样本，可采用 RNAlater 等 RNA 保护液进行送样，注意完全按照 RNA 保护液操作，尽量使组织块尺寸保持在 5mm 左右，过小不利于样本收集，过大则保护液不能均匀地渗透到组织。切记不可先 -80℃冻存后取出放入 RNAlater 浸润
• 动物样本可加裂解液（TRIzol，或其他同 TRIzol 使用方法一致的裂解液）；如果使用 TRIzol 裂解液保存送样，请务必先进行液氮研磨破碎，然后溶于 TRIzol 中液氮速冻；-80℃保存

细胞样本

• 生长状态良好的悬浮细胞或贴壁细胞
• 悬浮细胞：每 5×10⁶ 个细胞（非送样量）加入 1ml TRIzol 试剂，用枪头反复抽打细胞，直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；转移到离心管中，液氮速冻，放置 -80℃保存
• 贴壁细胞按每 10cm² 培养面积（相当于六孔板一个孔或 35mm 直径培养皿）加 1ml TRIzol 试剂；用枪头反复吹打，使 TRIzol 接触所有长有细胞的培养瓶表面，并进行充分消化，反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块；转移到离心管中，液氮速冻，放置 -80℃保存
• 此外，也可将细胞用 PBS 缓冲液快速洗一次，离心之后收集得到细胞沉淀，液氮速冻，放置 -80℃保存

血液样本

• 血液相关的产品只接全血或分离的细胞样本，不接血清/血浆
• 常见血液样本处理方法：（1）TRIzol 法；（2）PAXgene RNA tube 法（全血样本更推荐此保存方法，需自备 BD 管保存送样）；（3）离心分离得到白细胞或者 PBMC
• 除上述三种外，全血样本也可不做处理，直接液氮速冻，但由于血液中 RNA 含量低，同时血细胞容易破裂、释放 RNA 酶，造成 RNA 降解，所以提取成功率低
• TRIzol 法：先把血液放到抗凝管里，震荡混匀，使血液和抗凝剂充分混合，再抽出一部分和 TRIzol 混匀，TRIzol 和血的比例=3：1，震荡混匀，不要有血块，液氮速冻，-80℃冻存，干冰寄送
• 因转录组测序分析对 RNA 质量要求较高，建议 30 天内送样进行 RNA 提取

菌体

• 建议收集液体培养基中对数生长期的菌体
• 通过低速离心收集菌体并尽可能将培养基去除干净，然后用无菌水或 PBS 缓冲液冲洗样品 1～3 遍，送菌液沉淀
• 不建议用 RNAlater 保存，因为 RNAlater 密度较大，取时不易分离菌体
• 不建议加入裂解液，细菌的提取一般使用试剂盒
• 不建议加 TRIzol，影响菌体裂解
• 直接送滤膜时，建议送样≥5 张，不要将多张滤膜叠在一起后速冻寄送，将滤膜一张一张放入 50ml 离心管，液氮速冻 15min，-80℃冻存，干冰寄送

FFPE 样本

• 福尔马林固定后石蜡包埋的组织简称为 FFPE 样品
• 送样要求：1）厚度在 5–10μm，组织面积大于 25mm² 的切片 12 张；2）FFPE 样本常温或者冰袋寄送即可
• 样本准备建议：1）获得样本后，尽快开始固定；2）将样本切薄再浸泡（5–10μm 或更薄最好）；3）避免过度固定，浸泡时间过长；4）纯化的样品最好是固定或者包埋时间在半年内的样本，放置时间越长，对 RNA 纯化越不利

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自建库

• a. 客户自建库文库请使用 1.5ml 或 2ml 低吸附离心管装载。PCR 管、八联管、96 孔板等非标准管制备的文库需在送样前自行转管处理。
• b. 文库信息中样品名称只能包含字母、数字，不能以数字开头，名字长度不能超过 8 个字符，请用油性 marker 笔标注于管盖，其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。
• c. 文库需为无色透明的状态，不能含有沉淀、杂质或者絮状物，不能是黏稠状态，不能有颜色。