Sample Prepare
送样建议
提取风险提示和注意事项
核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。取样过程中，需要全程佩戴手套，并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒，以免样本污染。
组织样本
- 样本量：菌体≥2g，-80℃保存，干冰寄送
- 样本准备：对数期4ml菌液，4000×g离心10min（4℃），弃上清，沉淀（对应菌液离心）用无菌水洗2次后干冰送样，建议送2-3个平行，避免一次提取不成功
- 甘油保存的样本，需要重新液体培养基（例如 LB）活化到对数期，不可直接送甘油保存的菌株
- 不建议送固体培养皿的菌，如是只有固体培养基才能活，可以刮到有PB缓冲液的离心管里面，离心，送沉淀2g以上
- 真菌（＞0.5g）大型菇类等，建议送菌丝，不建议送孢子或是子实体，杂合率较高，不利于组装
- 样本一定为非灭活样本，灭活会导致核酸严重降解
- 不接收人间传染的病原微生物目录里涉及的菌种样本
核酸样本
浓度 >5ng/μl，体积 20μl≤V≤120μl ，总量>400ng。针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况,需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量
组织样本
- 土壤／污泥／沉积物／腐殖质：≥5ml（离心管刻度）或≥3g；建议使用5mlEP或15ml、50ml离心管进行装载，并用封口膜封口，使用自封袋容易撒漏导致样品交叉污染
- 粪便、肠道内容物≥2mL、食糜≥4mL（离心管刻度）或≥2g；粪便样本不建议保护液寄送，直接寄送粪便提取效果更好；拭子建议用保护液
- 瘤胃液／发酵液／组织液／冲洗液（离心有明显沉淀)3-5ml或沉淀≥1 g
- 水体、空气滤膜：直径4cm，滤膜3张（有明显颜色沉淀在滤膜上)
- 拭子：5-10个;无菌拭子反复擦拭，拭子表面有肉眼可见变化，对于较干燥的表面，可用生理盐水浸湿拭子后擦拭，以采取更多的微生物
核酸样本
浓度 >5ng/μl，体积 20μl≤V≤120μl ，总量>400ng。针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况,需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量
组织样本
- 植物组织>0.5g，成熟组织部位,例如植物根、茎、种子等部位建议2倍以上送样
- 动物组织>0.3g，核酸不丰富部位,例如脂肪、成熟皮肤、骨头等部位建议增加送样量
- 动物血液(哺乳类)>1mL；动物血液(红细胞有核类)> 0.5mL，血清血浆需酌情增加送样量
- 唾液>4mL
- 菌液(对数生长期)>4mL；菌体≥4mL菌液离心；真菌菌丝>0.5g
- 土壤>2mL（离心管刻度）
- 粪便、肠道内容物、食糜≥1mL（离心管刻度）；瘤胃液>2mL
- 胃液有浑浊,离心送沉淀为佳
- 水体(滤膜)：直径4cm，滤膜3张，如果菌群丰度较低，建议增加送样量
- 拭子>4个，拭子表面有明显颜色变化，达到富集微生物的目的
核酸样本
浓度 >5ng/μl，体积 20μl≤V≤120μl ，总量>400ng。针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况,需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量
组织样本
- 建议送样量：菌体细胞>1*107个或菌体>0.5g
- 建议收集液体培养基中对数生长期的菌体
- 通过低速离心收集菌体并尽可能将培养基去除干净，然后用无菌水或PBS缓冲液冲洗样品1~3遍，送菌液沉淀
- 不建议用RNAlater保存，因为RNAlater密度较大，取时不易分离菌体
- 不建议加入裂解液，细菌的提取一般使用试剂盒
- 不建议加TRIzol，影响菌体裂解
- 直接送滤膜时，建议送样≥5张，不要将多张滤膜叠在一起后速冻寄送，将滤膜一张一张放入50ml离心管，液氮速15min，-80℃冻存，干冰寄送
核酸样本
- 针对核酸有杂质、污染、粘稠、颜色等情况，需要过柱纯化后送样或者酌情增加送样量
- 核酸样品建议使用1.5ml、2ml EP管装载样品，其他保存管容易破裂且不利于保存样品和后续实验的开展
- 为了防止样品污染和混淆，禁止使用96孔板和深孔板装载样品
- 用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈
植物组织
• 成熟部位,例如植物茎、根、种子等部位建议2倍以上送样
• 需要清洗的样本，可以无菌水或75%乙醇冲洗表面，吸水纸吸干
• 样本离体后，在冰上立即分割50-100mg小块，2-3管备份，放置冻存管并立即液氮速冻，放置-80℃保存,避免未经速冻直接放-80℃保存
• 不建议使用RNAlater等RNA 保护试剂保存植物组织样品；因为植物细胞含有细胞壁，RNA保护试剂很难渗透
• 不建议使用TRIzol保存；TRIzol法并不适用于萃取大多数植物样本，植物组织中的RNA提取多采用专门的提取试剂盒，而TRIzol保存会影响试剂盒提取液的提取效果
动物组织
• 对于动物组织，建议选用新鲜样本，采集样品时应选取核酸含量较多的部位；核酸不丰富部位,例如脂肪、成熟皮肤、骨头等部位建议酌情增加送样量
• 生理盐水漂洗；剔除结缔组织等非研究组织
• 样本离体后，在冰上立即分割50-100mg小块，2-3管备份，放置冻存管并立即液氮速冻，放置-80℃保存,避免未经速冻直接放-80℃保存
• 无法及时用液氮速冻保存的样本，可采用RNAlater等RNA保护液进行送样，注意完全按照RNA保护液操作，尽量使组织块尺寸保持在5mm左右，过小不利于样本收集，过大则保护液不能均匀的渗透到组织。切记不可先-80℃冻存后取出放入RNAlater浸润
• 动物样本可加裂解液（TRIzol,或其他同TRIzol使用方法一致的裂解液）；如果使用TRIzol裂解液保存送样，请务必先进行液氮研磨破碎，然后溶于TRIzol中液氮速冻；-80℃保存c. 细胞样本
• 生长状态良好的悬浮细胞或贴壁细胞
• 悬浮细胞：每5×106个细胞(非送样量)加入1ml TRIzol试剂，用枪头反复抽打细胞，直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；转移到的离心管中，液氮速冻，放置-80℃保存
• 贴壁细胞按每10cm2培养面积（相当于六孔板一个孔或35mm直径培养皿）加1ml TRIzol试剂；用枪头反复吹打，使TRIzol接触所有长有细胞的培养瓶表面，并进行充分消化，反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块；转移到离心管中，液氮速冻，放置-80℃保存
• 此外，也可将细胞用PBS缓冲液快速洗一次，离心之后收集得到细胞沉淀，液氮速冻，放置-80℃保存d. 血液样本：
• 血液相关的产品只接全血或分离的细胞样本，不接血清/血浆
• 常见血液样本处理方法：
（1）TRIzol法；
（2）PAXgene RNA tube法（全血样本更推荐此保存方法，需自备BD管保存送样）；
（3）离心分离得到白细胞或者PBMC。
除上述三种外，全血样本也可不做处理，直接液氮速冻，但由于血液中RNA含量低，同时血细胞容易破裂、释放RNA酶，造成RNA降解，所以提取成功率低
• TRIzol法：先把血液放到抗凝管里，震荡混匀，使血液和抗凝剂充分混合，再抽出一部分和TRIzol混匀，TRIzol和血的比例=3：1，震荡混匀，不要有血块，液氮速冻，-80℃冻存，干冰寄送
• 因转录组测序分析对RNA质量要求较高，建议30天内送样进行RNA提取
样本打包及寄送建议
样本的打包
（1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。
（2）组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。
（3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
（4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。
（5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
（6）为便于处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。
样本的名称标识
（1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。
（2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
（3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。
（4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。